恒河猴和食蟹猴ABO血型竞争性等位基因PCR（KASP） 检测方法的建立

目的 人的ABO血型常规免疫学检测方法不适用于实验猴猕猴血型检测，而实验猴血型鉴定在器官移植等研究中必不可少。本研究目的是建立一个快速、可靠的恒河猴与食蟹猴猕猴ABO血型核酸鉴定方法。方法 本室建立了一种新的ABO血型的分子学检测方法，利用竞争性等位基因PCR（KASP）技术，通过识别与血型密切相关功能基因的2个SNP位点上的碱基，对恒河猴与食蟹猴血型进行分型，并通过设计2个SNP位点外围的普通PCR引物，对KASP方法鉴定出的血型样本进行Sanger测序鉴定。结果 比对了15份用Taqman PCR方法已确定血型的食蟹猴全血核酸样本，新建立的KASP分型结果与原血型结果完全一致，为了保证KASP方法鉴定结果的准确性，实验人员用新建立的普通PCR方法通过Sanger测序验证了KASP方法与测序结果完全一致。为了对新建的KASP方法重复性进行验证，选取了已知血型的6份实验猴全血，每份血样做5个重复，结果显示该方法有极好的重复性。进一步用新建的KASP方法检测了51份临床样本，其中食蟹猴样本38份，恒河猴样本13份，同一样本的2个位点的血型结果完全一致，其中A型血9份（17.6%），B型血19份（37.3%），AB型血23份（45.1%），未检出O型血。同时从A型、B型、AB型的临床样本中，各型分别选了5个样本，进行普通PCR扩增及测序分析，证明2个SNP位点上的序列与KASP分型结果一致。结论 新建的KASP血型鉴定方法准确性高，可用于实验恒河猴与食蟹猴的ABO血型的快速检测。该方法相较于传统的血清学或测序方法，简单快捷，经济可靠，结果易于判读，同时对样本的要求比传统的血清学方法低，新鲜或存放较久的全血、唾液或核酸等都可以用于检测。